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几种微生物实验中常用的稀释剂

放大字体  缩小字体 发布日期:2011-01-05  浏览次数:6493
核心提示:微生物检验和实验中取样后常常要做一系列的稀释,就要用到稀释剂,本文将食品检验或者试验中要用到的几种稀释剂做了一个概括介绍。

    大多数细胞都适合在pH值7.2-7.4范围内生长,当然不同种类细胞对pH值的要求也不尽一致,同一种细胞在不同生长时期的最适pH值也有所不同。原代培养细胞对pH值要求较严,传代培养细胞对pH值要求较宽。一般来讲,细胞对偏酸环境的耐受性要强于偏碱环境。培养过程中,严格控制培养液的pH值,有利于细胞的生长。细胞生长越旺盛,代谢越活跃,pH值改变越迅速。代谢物的滞留使培养液变酸变黄,对细胞生长不利。因此,通常在培养液中均加入一定量的缓冲液,以保持pH值在一定范围内的相对稳定。

    平衡盐溶液(Balanced Salt Solution,BSS)与细胞生长状态下的pH值、渗透压等环境状态一致,具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用,可满足体外实验中,细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。细胞在BSS中可生存几个小时,且BSS配方简单,成本低,因此成为配制各种组织细胞培养用液的基础溶液,也是组织细胞体外短暂保存,分离、纯化和洗涤等实验操作的常用溶液。

    磷酸盐缓冲液(PBS) 是最常用的平衡盐溶液(BSS)之一。由磷酸一氢盐和磷酸二氢盐的混合溶液组成,其中磷酸一氢盐是呈碱性的,而磷酸二氢盐是呈酸性的。当微生物分泌酸性物质时会与磷酸一氢盐反应生成磷酸二氢盐;当分泌碱性物质时则与磷酸二氢盐反应生成磷酸一氢盐。这样就使整个体系维持在一个PH较稳定的范围。由于磷酸缓冲液近中性,恰在生理性pH范围缓冲力最强,且成本相对较低,成为生命科学领域应用最广、最普及的无机盐缓冲液,也是免疫学、细胞生物学和分子生物学实验室必备的常用缓冲液之一。

    0.85%生理盐水 能保持细胞内卫的渗透压一致,避免细菌的细胞壁被破坏而影响细菌的生长和繁殖。避免细胞破裂,它可以使细胞在一个液体环境中,维持正常生理学平衡。避免操作过程中微生物失水或吸水过多,导致死亡。菌落总数要求不太高,但是生理盐水对于渗透压的维持还是有一定作用的,特别是对于那些“半死半活”细菌的检出很重要。但生理盐水也不是在任何情况下都适用的,检测盐份较高的样品时(如烤鳗、酱油等),不适合采用生理盐水,这种情况下用蒸馏水更合适。磷酸盐缓冲稀释液是SN(出口食品行业检验标准)检测菌落总数时推荐时,在GB中倒没明确提出这个,而是一般性推荐生理盐水。由于磷酸盐缓冲稀释液配制较为复杂,所以在正常情况下检测一般样品用生理盐水,当样品盐份较高时用蒸馏水。
   
    无菌水通常是灭菌后的蒸馏水。做霉菌和酵母检验的稀释液,用的就是蒸馏水。GB 4789.15-1994使用过高盐查氏培养基,样品稀释再使用生理盐水,容易搞乱盐浓度。所以,标准制定者叫选择了蒸馏水。实际上,蒸馏水无论对于单细胞的原核生物还是真核生物,都是有害的。从GB/T 4789.15-2003开始,删除了这种培养基。但是没有改变蒸馏水。在具体工作中,还是尽量不要使用蒸馏水来稀释样品为好。因为通常一份样品常常需要同时检验细菌和真菌,不可能单独称量,之后分别稀释的。

    蛋白胨是动植物蛋白经酶水解后的月示、胨、肽及氨基酸等复杂的混合物,吸湿性很强,易溶于水,系两性电解质,有一定缓冲作用。有学者自己做实验时候用蛋白胨水代替磷酸盐或者生理盐水稀释,目的是让样品中菌种在稀释过程中保持活性,免于死亡,但是稀释时间一定要控制在15分钟之内。
 

编辑:songjiajie2010

 
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