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石蜡切片的制作

放大字体  缩小字体 发布日期:2013-08-09  来源:实验室资讯网  浏览次数:719
核心提示:以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在46微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米
 以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中最普通常用的一种方法。
 
一、切片前的准备: 
1、恒温水浴 锅首先预热至35℃—40℃。
2、蜡块整修,将蜡块组织面的石蜡用刀修去,使组织全部暴露出切面并修平,以减少切片刀的磨损。将组织块左右两侧的石蜡在不损伤组织及影响诊断的原则上,全部切除;否则切片容易皱褶。组织块上下边缘的石蜡视组织情况修齐修平;石蜡不须留得过多,应尽量少留,以保持组织间距的最小限度。这样切下的切片既呈带状,也不弯曲。片距小,在贴片时就可相应多贴片,有利于检查诊断。修切蜡块时只能一点一点地切掉蜡边,要是大片修切易使蜡块断裂露出组织;遇此情况应返入新蜡再次包埋。
3.载玻片应事先洗涤干净,无油腻和不透明现象,应将载玻片浸入酸缸内12小时后流水冲洗,再烤干备用。根据切片需要张数,每片涂上一层极薄的蛋白甘油,插于载片板(或载片架)上备用。
蛋白甘油的配制:取新鲜鸡蛋1份加甘油1份再加适量麝香草酚搅匀。此法主要是防止脱片,实际上一张很清洁的载玻片不涂蛋白甘油也不会脱片。
4、将锋利的刀片装入切片刀夹钳内,调整角度和位置后随即紧固,检查切片刀的倾斜度是否正确,倾角过大、则切片上卷;倾角过小则切片皱起,以20°-30°为佳。
5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
 
二、切片的步骤:
1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内,调整到稍离开切片能够切到的位置上,注意蜡块组织切面与切片刀口要垂直平行。
2、再调整蜡块组织切面恰好与刀口接触,旋紧刀架,固定好机头。
3、根据需要调整切片厚度。
4、摇动切片机手轮先进行修整切片,直到切出完整的最大组织切面后,再进行切制。
5、实践中可用右手转动切片机手轮,左手用毛笔托起蜡片,协调地进行切片操作。
6、切下的切片带,一端用镊子轻轻拉起,应尽可能将切片带拉直展开,用毛笔将切片带从刀口向上挑起,拉下切片带,然后轻拖铺于恒温水面上。
 
三、切片的注意事项 
1、切片质量的好坏,除与技术熟练程度和切片机的好坏有关外,切片刀是决定的因素,所以刀一定要磨得十分锋利。否则在切片时会自行卷起或皱起,或将组织划伤出现刀痕,更不能顺利地将切片切成连续地长条带状。切片刀如有缺口存在,将使制成的切片断裂、破碎,不完整,切片时应时时擦净刀口。
2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧,否则将会产生震动。在每次更换蜡块时,应习惯地检查一下组织块是否夹紧,切片刀是否稳固,稍有疏忽就会影响切片质量,甚至将蜡块全部切坏,造成不可弥补的后果。在切制切片的开头阶段如出现切制不良与其他故障,最常见的原因是蜡块或切片刀的松动所致。
3、在摇动切片机时,用力要求均匀一致,不宜过重过猛,否则可因用力过重而使机身震动,造成切片厚薄不均。遇有硬化过度的脑、肝、脾等组织时,更应该轻轻切削,以防组织由于震动形成空洞现象。
4、在夏秋季节进行切片时,应使用冰块加强冷却,这样不仅可保持石蜡的硬度,同时也减少了切片的褶皱,给切片制作带来方便。
 
四、贴片 :
1、将单张或数张切片,用镊子夹住蜡片的一边并提起,铺于恒温水中,(光亮的一面朝下)立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。如有皱褶时用镊子细心地逐个轻轻拨开,注意不可拨破组织。然后分开每张切片,选取其中最完整的,没有皱褶的切片。
2、待切片在恒温水内充分摊开展平后,将载玻片垂直插入水中以涂有蛋白甘油面轻靠切片,并用毛笔将切片一边拨于玻片上,随即将玻片直立提起,趁玻片上仍有少量水份时用毛笔,拨正切片位置。如组织较小,可在玻片上多贴几片或几排,但排列应密集、整齐。
3、用铅笔在玻片一端的毛玻璃上写上标本编号,字要写得小而清楚、端正。
4、将附贴好的切片置于60℃恒温箱 内干燥2小时,蛋白质凝固后即可进行染色。
 
编辑:songjiajie2010

 
关键词: 石蜡切片 制作
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