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革兰氏染色小常识

放大字体  缩小字体 发布日期:2016-12-22  来源:食品微生物学实验原理与技术  浏览次数:1856
核心提示:本文对革兰氏染色的原理、意义、步骤及注意事项进行了阐述,为检验从业人员提供参考!
一、原理:

  通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经番红等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
 
二、步骤
 
  革兰氏染色法的步骤为:涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
1、涂片 
  首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水,用灼烧过的接种针挑取少量细菌,置于载玻片的水滴中与水混合并涂抹开。注意涂抹要均匀平坦,涂抹成直径约为1 cm的薄层。 
2、固定
  将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次,以载玻片的加热面接触手背皮肤,不觉过烫为佳;待冷却后再在火焰上方来回通过一两次,再冷却,重复操作直到薄层变干。
3、结晶紫染色 
  染色1分钟,然后水洗并用吸水纸吸干。
  碘液媒染 染色1分钟,然后水洗并吸干。
4、酒精脱色
  用95%酒精脱色,直到酒精不出现紫色时即停止(大约半分钟),然后立即水洗,并吸干。
5、番红复染 
  染色3分钟左右,然后水洗并吸干。
6、镜检
  在显微镜油镜头下观察,菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌;菌体显红色的为革兰氏阴性菌。
 
三、结果
 
  染色结果革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
四、意义

1、鉴别细菌 
2、选择药物 
3、与致病性有关
  革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素;而内毒素主要是指革兰氏阴性菌胞壁成分中的脂多糖,两者的致病作用不同。
 
五、注意事项
 
1、注意涂片不宜过厚,勿使细菌密集重叠,影响脱色效果,否则脱色不完全造成假阳性。镜检时应以视野内分散细胞的染色反应为标准。
2、火焰固定温度要适宜,以玻片不烫手为宜,否则菌体细胞变性。
3、滴加染色液与酒精时一定要覆盖整个菌膜,否则部分菌膜未受处理,亦可造成假象。
4、乙醇脱色是革兰氏操作的关键环节。如脱色过度,则G+被误染成G-菌,而脱色不足,G-被误染成G+菌。在染色方法正确无误的前提下,如菌龄过长、死亡或细胞壁受损伤的G+也会呈阴性反应,故革兰氏染色用要对数生长期的幼龄培养物。
5、染色过程的时间控制。应根据季节、气温调整。一般冬季时间可稍微长些,夏季可稍微短些。

参考文献:
李平兰、贺稚非《食品微生物学实验原理与技术》
编辑:foodec007

 
关键词: 革兰氏染色
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