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分享|培养基制备规程及使用规程!

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-07-10  来源:食品实验室公众号  浏览次数:73
核心提示:一、培养基制备规程1.目的规范本中心微生物实验室培养基制备工作,保证培养基的质量。2.适用范围本规程适用于使用商品化干粉培养
 

一、培养基制备规程

 

1.目的

规范本中心微生物实验室培养基制备工作,保证培养基的质量。

 

2.适用范围

本规程适用于使用商品化干粉培养基制备各种待用培养基。

 

3.职责

3.1 培养基制备人员负责按本规程制备各类培养基,及时填写成品培养基制备记录,编制培养基目录,粘贴标签。

 

3.2 科室负责人:负责指导、监督检验人员按规程制备培养基。

 

4.制备程序

 

4.1 概述

4.1.1 制备培养基所用的化学药品,均为化学纯。有些试剂在使用前应先试用。

 

4.1.2 使用脱水培养基和其他含有有害物质(如胆盐或其他选择剂)的成分时,应遵循良好实验室规范和生产厂商提供的使用说明。

 

4.1.3 使用商品化脱水合成培养基制备培养基时,应严格按照厂商提供的使用说明配制。如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。

 

4.1.4 使用各别成分制备培养基时,应按配方准确配制,并记录所使用成分的特性。

 

4.1.5 制备培养基常用的容器为玻璃、不锈钢铝、锅或搪瓷容器。不宜使用铜或铁锅。培养基中的含铜量过高时(>0.3mg/1000ml),细菌不易生长;含铁量过高时(>0.14mg/1000ml),则妨碍细菌毒素的产生。

 

4.2 水

4.2.1 制备培养基应使用蒸馏水或相同质量的水,以排除测试条件下抑制或影响微生物生长的物质。电阻率在25℃时应≥300000Ω·cm。最好每周检测一次。

 

4.2.2 制备培养基时避免采用离子交换器生产的去离子水,其微生物含量可能较高,这种水在过滤灭菌后仍可能带有细菌生长的抑制因子。

 

4.3 称量和复水

4.3.1 称量所需量的脱水培养基(注意缓慢操作,必要时佩戴口罩或在通风柜中操作,以防吸入含有有毒物质的培养基粉末),先加入少量的水,充分混合(注意避免培养基结块),然后再加水至所需的量。

 

4.3.2 必须选择合适的天平和量筒,以确保称量和移液的准确性。

 

4.4 溶解和分装

脱水培养基加水后应适当加热,并不停搅拌使其快速溶解,必要时,重新溶解。含琼脂的培养基在加热前应先浸泡几分钟。用各别成分制备的培养基应将不同成分分别加入适量的水中,并充分溶解,然后再加水至所需的量。

 

4.5  测定和调整PH

4.5.1 用PH计或精密PH纸测pH,必要时进行调整。

 

4.5.2 在实验室用各别成分制备的培养基,除特殊说明外,培养基灭菌后冷却至25℃时,PH的变化不应超过0.2个单位。

 

4.5.3 一般使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。

 

4.6 分装

将配制好的培养基根据使用要求分装到适当的容器中,并及时密封好。

 

4.7 灭菌

4.7.1分装好的培养基应当天进行灭菌处理(2小时内灭菌最佳)。

 

4.7.2实验室采用湿热灭菌对培养基进行灭菌处理,按照培养基使用说明采用合适的灭菌温度和时间。

 

4.8 保存

制就的培养基不宜保存过长,以少量勤做为宜。培养基存放于暗处和(或)4℃~12℃冰箱的密封袋或平皿筒中可延长贮存期限。

 

4.9 制备记录

培养基制备完毕后,应及时填写“成品培养基制备记录”和“成品培养基目录清单”,并在外包装上贴好相应的标签,标明名称,编号,制备日期和有效期等内容。

 

 

二、培养基使用规程

1. 目的

规范本中心微生物实验室培养基的使用和管理。

 

2. 适用范围

本规程适用于培养基的储存、融化和废弃等。

 

3. 职责

3.1 检验人员:按照本规程规范使用培养基、定期检查培养基是否失效。

 

3.2 科室负责人:负责指导、监督检验人员规范使用培养基。

 

4.使用程序

 

4.1 培养基的储存

4.1.1 除特殊说明和标准规定,通常情况下基础培养基(如营养琼脂培养基)应在4℃冰箱中保存不超过3个月,或在室温(20℃)下保存不超过一个月。

 

4.1.2 灭菌后的培养基应置适当条件下保存至规定的有效期,并对保存条件进行确证,详见表1。

                                       表1  培养基2~8℃条件保存期限

培养基种类

保存条件

保存时间

平板培养基

不密封

2

密封

6~8周

试管培养基

(棉塞)

不密封

2~4周

密封

8~10周

试管培养基

(软木塞或腊封)

不密封

8

密封

16~18周

 

4.2 琼脂培养基的融化

4.2.1 将培养基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法(如高压锅中的蒸汽,如100℃)使之融化。经过高压的培养基应尽量减少重加热时间,避免过度加热。

 

4.2.2 培养基融化后放入47℃±2℃的恒温水浴锅或恒温培养箱中保温,直至使用。

 

4.2.3 融化后的培养基应尽快使用,放置时间一般不应超过4h,不可二次融化。

 

4.3 培养基的脱气

必要时,将培养基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加热15min,加热时松开容器的盖子;加热后盖紧,并迅速冷却至使用温度。

 

4.4 添加成分的加入

对热不稳定的添加成分应在培养基冷却至47℃±2℃时再加入。灭菌的添加成分在加入之前,应先放置到室温,避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。将加入添加成分的培养基缓慢充分混匀,尽快分装到待用的容器中。

 

4.5 平板的制备和储存

4.5.1 倾注融化的培养基到平皿中,使之在平皿中形成一个至少2mm厚的琼脂层(直径90mm的平皿通常要加入15mL琼脂培养基)。将平皿盖好皿盖后放到水平平面使琼脂冷却凝固。

 

4.5.2 为了避免产生冷凝水,平板应冷却后再装入袋中。贮存前不要对培养基表面进行干燥处理。

 

4.5.3 凝固后的培养基应立即使用或放于暗处和(或)4℃~12℃冰箱中,储存期限见“4.1培养基的储存”。 并在外包装上贴好相应的标签,标明名称,编号,制备日期和有效期等内容。

 

4.5.4 对于采用表面接种形式培养的固体培养基。应先对琼脂表面进行干燥:揭开平皿盖,将平板倒扣于烘箱/培养箱中(温度设为25℃~50℃);或放在有对流风的无菌净化台中,直到培养基表面的水滴消失为止。注意不要过度干燥。商业化的平板琼脂培养基应按照厂商提供的说明使用。

 

4.6 培养

4.6.1 培养时每垛最多堆放六个平板,平板间要留有空隙以保证空气流通,使培养物的温度尽快与培养箱温度达到一致。

 

4.6.2 在培养过程中,培养基会损失水分。当水分损失的量大于培养基总量的15%时,就会影响微生物的生长。造成培养基水分损失的因素较多,如培养基成分,平皿中培养基总量和培养箱的类型等(如使用带风扇的培养箱,培养箱中的湿度偏低,平板在培养箱中位置靠近培养箱内壁等),操作时应注意避免。

 

4.7 培养基的弃置

培养基废弃前,实验室采用121℃、15分钟蒸汽灭菌,或煮沸消毒30分钟。

编辑:songjiajie2010

 
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