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PCR实验室污染?别急,教你万能应急法

放大字体  缩小字体 发布日期:2022-04-08
核心提示:PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假
 

 

PCR检测因其高灵敏度、快速、操作方便等优势已经被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性,因此所有的预防措施都会稍稍有所不同。「易查不易察」,污染来的悄无声息,我们该如何应对。
那么,如何避免以及处理实验室污染,对
PCR人来说是一门必修课。


PCR 实验室污染分类



 

1、样本间交叉污染

主要是在采(取)样的过程中,由于取样工具之间的交叉造成污染;或者在核酸提取的过程中,由于移液器、离心管等使用不当导致的污染。

2、PCR试剂污染

主要是在 PCR 组分试剂加样过程中,由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。

3、PCR扩增产物污染

这是 PCR 反应中最主要最常见的污染问题。因为 PCR 产物拷贝量大,远远高于 PCR 检测数个拷贝的极限,所以极微量的 PCR 产物污染,就可形成假阳性。

还有一种容易被忽视的污染,是能造成PCR产物污染形式的气溶胶污染,而气溶胶造成的污染是一个值得特别重视的问题。

4、克隆质粒污染

在实验操作中会经常用到阳性参考品,这些参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成的,质粒在单位容积内浓度高,不小心使用极易造成污染。

 


实验室污染处理方法



1.物料准备

(1).购买喷壶(能够喷出雾状水汽的即可);
(2).购买市面上有效氯消毒片,根据要求配置不同浓度的消毒液,或者购买成品次氯酸钠消毒液配制合适浓度消毒水;
(3).购买核酸气溶胶污染清除剂(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀释100倍);
(4).无纺布/无尘纸等。

 

2.应急处理方法

(1).清理废液缸并且对废液缸用有效氯含量为2000mg/L消毒水浸泡消除核酸污染;

(2).用有效氯含量为2000mg/L消毒水对移液枪进行擦洗,关键部位为移液枪前端易污染部位,清洁干净后用洁净水再擦拭一遍;

 

(3).将离心管架、扩增管架、扩增管架底板、吸嘴盒及其他相关物品用有效氯含量为500mg/L的消毒水浸泡2小时后,用清水冲洗干净晾干后使用;

 

(4).对污染区域内的设备如扩增仪、全自动提取仪等,使用核酸气溶胶污染清除剂进行反复处理;对生物安全柜等含有空气过滤系统的设备,需更换过滤网;

 

(5).用有效氯含量为500mg/L的消毒液对整个实验室(地板、墙面、天花板、门、窗户等地方)进行清洁,并且用用有效氯含量为1000mg/L的消毒水对实验室进行喷雾消毒(重点部位为操作区),有效降解空气中的气溶胶与附着在实验台表面的核酸污染;同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);

 

(6).待污染区域及设备器件清理完成后,常用设备和操作台面使用移动紫外消毒车近距离辐照1小时;实验室内则使用室内紫外灯整晚辐照。

 

以上措施每日进行,直至污染消除;步骤(1)-(6)必须坚持每天进行,确保消除实验室污染;

 

3.消除污染判定标准

设计阴性对照组,根据阴性对照确认污染情况。可使用敞开后隔夜放置操作区的阴性对照进行实验(在单独的实验室验证),若连续三天阴性对照没有起跳,则说明污染得到控制,可恢复正常实验。

 

 


 


污染,是 PCR 实验室出现实验假阳性、结果不可信、研发不可靠的重要推手。

在最初开展PCR实验室的时候,应最大程度的降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现,在实验室前期设计及日常实验室管理和操作中,就需要进行合理的规划以及严格执行实验室SOP,把污染的可能性扼杀在摇篮中。

 

编辑:songjiajie2010

 
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关键词: 污染
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