中国检验检疫科学研究院综合检测中心 王芳 王凯 樊赟

北京陆桥技术有限责任公司 刘沛 王磊

      近年来，我国食品安全事故频发，痛定思痛，人们已经越来越重视饮食安全。而由微生物引起的食品污染问题作为食品安全的重要内容也受到了广泛关注。在食品生产过程中，从生产加工到运输销售，各个环节都有可能被微生物污染，因此对食品进行微生物检测必不可少。另外，随着经济的飞速发展，社会商品的流通量和流通速度大大增加，食品将面临很大的微生物污染风险，但传统微生物检测方法不仅操作繁琐，检测周期长，而且对检测人员要求高，很难满足现代商品快速流通的发展要求，甚至影响到整个食品行业的发展。因此，人们开始寻找一种快速、简单、准确的微生物检测方法，北京陆桥技术有限责任公司推出了一种可满足该要求的Easy TestTM测试片（在图中简称“ET测试片”）。

      Easy TestTM测试片利用了特异性酶与特异性显色底物反应的原理，使目标菌与非目标菌呈现可明显区别的不同特异性颜色；Easy TestTM测试片的培养载体采用了无纺布和水溶性营养底物的设计，具有良好的吸水性，可快速吸收测试液，使微生物自动均匀分布于无纺布上，为测试液和营养底物创造了一个固定的混合区域；Easy TestTM测试片为一次性即用产品，操作简便、无需耗费大量人力配制培养基和高压灭菌、后续废弃物的处理工作简单、环保，并且最重要的是可以有效缩短检测时间、提高检测效率，非常适用于食品微生物检测和环境卫生监测。

      为验证Easy TestTM测试片的准确性和适用性，本文将Easy TestTM测试片与3M PetrifilmTM测试片（在图中简称3M测试片）和国家标准中的传统培养法进行样品比对试验。检测项目包括菌落总数、大肠杆菌计数和大肠菌群计数，具体试验过程与试验结果如下。

      试验方法

      选取100份食品样品，包括肉制品、乳制品、蔬菜、豆制品、水果、油炸食品、面点、饮料、水产品、速冻食品和调味品，以国家标准方法GB 4789-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验》为检测依据，采用Easy TestTM测试片、3M PetrifilmTM测试片和国标的传统培养基法分别测定各个样品的菌落总数、大肠杆菌数和大肠菌群数，再将Easy TestTM测试片的结果分别与3M PetrifilmTM测试片和国家标准中的传统培养法得到的结果进行比较，然后根据相关性判断Easy TestTM测试片的准确度和适用性。 

      试验结果与分析

      菌落总数试验

      Easy TestTM菌落总数测试片以TTC（氯化三苯四氮唑，一种氧化还原指示剂）为显色物质，TTC接受微生物呼吸链产生的氢后可形成非水溶性的红色三苯甲脂，红色三苯甲脂经微生物作用会在Easy TestTM测试片的无纺布上形成红色点状物（Easy TestTM测试片上的菌落分布情况见图3），通过计数红点，即可获得菌落总数。Easy TestTM菌落总数测试片的培养条件为36±1℃，48±3h。

      由图1和图2可以看出，Easy TestTM菌落总数测试片与3M PetrifilmTM测试片所得菌落总数值的相关系数为0.9913，而Easy TestTM菌落总数测试片与PCA平板所得菌落总数值的相关系数为0.9967。可见，Easy TestTM测试片与PCA平板法具有良好的一致性，而Easy TestTM测试片与3M测试片一致性要低于Easy TestTM测试片与PCA平板法的一致性。通过分析，我们发现出现此种结果的原因为某些样品在3M测试片上出现液化现象，使测试片无法准确计数，而Easy TestTM测试片采用了无纺布设计，可以完全避免液化现象，从而得到更真实、更准确的数值，适用性也更广。

     图1 ET测试片与3M测试片的相关性                 图2 ET测试片与PCA平板的相关性

图3 Easy TestTM测试片上的菌落分布情况

      大肠杆菌/大肠菌群试验

      Easy TestTM大肠杆菌/大肠菌群测试片测试原理为：大肠杆菌和大肠菌群中的特异性酶降解显色底物，打破底物原有结构，释放出显色因子，从而使大肠杆菌显示为靛蓝色或紫色菌落，其他大肠菌群显示为蓝绿色菌落，然后进行计数。Easy TestTM大肠杆菌/大肠菌群测试片的培养条件为36±1℃，24±1h。

      100份试验样品中仅有7份样品检出大肠杆菌，结果见表1，Easy TestTM测试片与3M测试片和GB/T 4789.38-2008平板计数法的检测结果都具有较好的一致性。

      表1 大肠杆菌检测阳性结果

      大肠菌群计数传统方法采用GB 4789.3-2010《食品微生物学检验 大肠菌群计数》中第二法平板计数法进行，图6为大肠杆菌和大肠菌群在Easy TestTM测试片上的生长情况。由图4、图5可以看出，Easy TestTM大肠杆菌/大肠菌群测试片和3M测试片所得出的数值相关系数为0.9522，而Easy TestTM大肠杆菌/大肠菌群测试片与传统方法的相关系数为0.9648。Easy TestTM测试片与传统方法的相关性要略高于和3M测试片的相关性，原因可能是3M测试片在压片过程中会有部分样液被压出计数范围，从而使整个计数结果产生偏差。而Easy TestTM测试片由于有无纺布作为固定培养区域，且吸水性良好，故可避免此问题。

图6 大肠杆菌和大肠菌群在ET测试片上的生长情况

      目前，测试片作为一种微生物快速检测产品已经逐步被广大检测工作者所接受，测试片法所利用的特异性酶与特异性显色底物的反应原理也被大家所信任。Easy TestTM测试片采用无纺布为载体，不仅可以快速自动吸收测试液，省却压片操作，还可有效避免人为操作对检测结果的影响。此外，使用Easy TestTM测试片进行测试时，测试液在一个固定的区域内，不会外溢，这使计数结果更加准确，同时也避免了样液污染。也正是因为具有了以上众多优点，Easy TestTM测试片已经广泛应用于食品检测领域。