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大家好
告别期盼已久的新年假期
迎来紧锣密鼓的开工日子
迎着开工的阳光
撸起袖子加油干！
节前1月21-22日
“食品微生物实验室技能提升专题培训班”
线上直播完美收官
课程结束后
小伙伴们提出了工作中的一些疑问
虽然老师进行了耐心的解答
小伙伴们感觉有些问题理解不到位
希望有文稿版的
利于巩固学习
小编根据小伙伴们反馈的问题
经过认真回听课程
对于老师们的答疑进行一一整理
由于内容较多
将分批分享给大家
请各位小伙伴查收今日份的知识
标准菌株存活性怎么进行？
答：标准菌株存活性就是其的复活过程，我们购买的标准菌株一般是冻干粉或者冻干管，然后我们要对其进行复活培养，这个过程是必须的，否则我们没有办法使用。针对其存活性的验证，所有的标准法规中都是其存活性的判断，一个定性的判断。复活的过程对其进行打管，按照标准要求进行培养，如果接种到液体培养，有肉眼可见的浑浊或者进一步镜检时有目标微生物生长；如果接种到固体培养上，有肉眼可见的菌落，这些都叫存活性合格。
什么算标准菌株的商业衍生物？
答：标准菌株的商业衍生物是根据客户需求生产的一种产品。标准菌株到标准储备菌株的过程，我们的法规对菌株的确认、保藏、管理的生物安全要求是很高的，而符合标准的商业派生菌株可以直接使用。但是商业派生菌株的可追溯性一定是专业的标准菌株机构授权的。
购买的标准菌株，证书上写的是3代，这个怎么理解从菌种保藏机构获得的标准菌株为第0代？
答：如果证书上写的是3代的话，那就是商业派生菌株，就不是标准菌株，也就不是理解的0代标准菌株。
GB 4789系列什么情况下应作阳性对照，假如检测50批样品致病菌都是阴性结果，需要人工污染样品做阳性对照来做质控吗？
答：GB 4789.1里规定要定期进行，没有明确说什么时候进行。自己实验室需要制定sop进行规定，比如我们实验室总是检出某个致病菌的阳性结果，就规定一个月的时间来进行阳性对照。保证实验室人员具有可以持续进行阳性检出的能力的。最新的RB/T 038-2020 食品微生物检测结果质量监控指南文件里规定：对于日常质量监控,应执行检测方法的规定，否则建议每批或每组样品每20个样品1次的频次进行；质控不一定需要人工污染样品来做，可以用标准菌株来做阳性和阴性对照。
怎样确认菌株的存活性，纯度和关键特征指标，怎样才算合格？
答：存活性第一的问题已经讲解了。纯度要从菌落形态、显微镜里的形态去确认其是否符合其标准形态；关键特征指标根据预期使用目的，标准方法的要求对标准菌株进行确认；存活性生长、纯度是纯的、关键特征指标符合预期的标准就算合格。
我们已经磁珠冻存好菌种了，没有做菌种确认，现在可以补救吗？菌种在0.85生理盐水过夜培养，里面没有营养成分，怎么能叫一代呢？
答：可以补救。一般没有用0.85生理盐水过夜培养的，0.85生理盐水一般是用作稀释液，不能为标准菌株提供营养液的不能叫一代。
除商业派生菌株外，从同行中获得的，也是从认可的菌种中心获得的，是否也认可？
答：可以认可。但是前提是要有溯源性的文件，拿到后也要对其进行确认的。
老师，工作菌株和储存菌株，在文件上有没有具体要求。在我们自己的文件，冷藏保存，斜面TSA储存菌株要求7天，液体TSB工作菌株要求3天，对于我们来说，储存时间有些短，不知道GB有没有相关文件要求说明
答：没有。澳大利亚有个推荐标准有说到斜面可以存储几天、液体可以储存几天。如果我们实验室要延长某个或者某一类菌种的储存，需要进行验证其时间是可以的，然后修改我们的文件规定来延长其保存的时间。
-20℃菌株保存有相关的可参照标准吗？
答：没有。GB 4789.28里说较高的温度储存是可以的，但是在较高温度下贮存时间是多长时间，实验室要根据需要进行数据验证。
比如在供应商处买的冻干粉形式的质控菌株是商业派生菌株还是标准菌株？
答：要看供应商提供的溯源性文件是谁制造的。
关键特性如何做？
答：要看预期的目的，比如要做沙门氏菌就要看其关键特性是否符合沙门氏菌的特性。
人工污染样品菌悬液的浓度如何确定？
答： 人工污染样品就是要模拟天然的样品，人工污染样品菌悬液的浓度就要参考实际样品中的这种菌种的浓度来定，如果实际样品检出率很低或者没有检出过，那么它的可能存在的浓度是很低的，你的人工污染样品菌悬液的浓度也要降低（比如100CFU左右）来做。
请问买的定量工作菌株（100cfu直接用的）可以直接用吗，要验收吗？
答：可以直接用的，对于验收没有硬性的规定。你可以信息层面的验收。一般的定量工作菌株生产商都有一个严格的控制的，比如对运输的稳定性也是做了评估的，买的定量工作菌株要是专业的机构的。
植物乳杆菌用什么培养基做纯化，和做什么关键特性呢？
答： 植物乳杆菌就用MS就可以，关键特性要看标准的要求。
菌种保存是否一定要-70度保存，可以-50度保存吗？
答： 要根据设备的特性来的，-70度的冰箱你可以调到-50度保存，但是提高温度对其长期的保存会有影响的，保存期要进行验证的。
已经冻存好的标准储备菌株每年都需要确认么？
答： 如果按照设备的条款下的话，每年要进行一次期间核查的要求，相当于每年要做一次确认。不同的核查老师对这个要求掌握是不一样的。个人认为，从专业的角度讲每年进行一次确认还是有必要的。
标准菌株具体怎么去做阳性、阴性对照， 直接加入样品当成样品去吗？
答：不是的，如果阳性、阴性对照直接加入样品里，没有检出来的话，你就没有办法判断你添加的数量不对还是你的菌株有问题。建议直接用纯的阳性、阴性菌株来做对照。
2代-80度冻干磁珠管取出一颗磁珠置BHI过夜培养，培养后菌悬液再划斜面，是不是斜面就是第四代了？BHI过夜培养的目的不是复活菌株么，能算一代吗？
答：是的，斜面就是第四代了，BHI过夜培养肯定算一代的（因为BHI为菌株提供营养）。
标准菌株从同行获得，但菌种清单会有购买单位，不是本单位，然后菌种说明书之类的复印过来也是可以的吗？自己再做好验证确认是不是就可以了？
答： 不建议从同行流转的方式获得。这个溯源链有点长，期间的还有运输、包装的过程，同行也没办法为你提供什么时间为你提供菌株的证明。还是建议溯源链，从实验室直接到菌株保藏中心的。
请问老师，制备一定浓度的菌悬液怎么去测这个浓度，除了菌落计数法，在有的试验里面这个菌悬液制备了就立马要用？比如抗菌试验需要用到一定浓度范围的菌悬液？
答：如果是抗菌试验，你就要预试验，把前面的菌悬液制备的各个标准做个标准化，保证制备完第二次可以直接用。
标准菌株期间检查主要检查些什么？
答： 这个跟确认过程是一样的，确认其存活性、纯度、关键特性等。
打管复活时吸取0.5ml液体培养基溶解后全部移到4-5ml液体培养基后打管的残留影响菌株的浓度吗？
答：不影响，因为打管复活是定性的过程。
