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大肠杆菌的检验方法

放大字体  缩小字体 发布日期:2010-05-13  浏览次数:16205
核心提示:    SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法    GB/T 4789.6-2003 食品卫生微生物学检验 致泻

    SN 0169-1992 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法

    GB/T 4789.6-2003 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验

    GB/T 4789.6-1994 食品卫生微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验(已经作废)

以SN标准方法为例,进行说明。

样品制备:
  以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1~2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
  稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。

  附:这是一种9管MPN法测定方法,什么是MPN法?

LST和EC初步筛选:
  对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培养48±2h。

  观察试管的产气情况:检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。

  附:LST肉汤、EC肉汤有些什么?

EMB平板:

  取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。

  检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落

  如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落;如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18~24h。

  附:怎样进行平板划线分离?

    平板划线示例

    EMB平板原理及照片

生化试验:
  将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。  
  1 色氨酸肉汤在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2~0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。

  附:靛基质试验原理及照片


  2 MR-VP培养基:在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm试管中,加5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40%氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
  将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。

  附:MR-VP试验原理及照片


  3 Koser氏枸椽酸盐肉汤:
于36±1℃培养96h记录有无生长。

  附:枸椽酸盐利用试验原理及斜面显色照片


  4 LST肉汤于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。
  5 革兰氏染色:取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。

大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下:


━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━
  靛 基 质┃   MR   ┃   VP   ┃  枸椽酸盐 ┃ 鉴定(型别)
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
    + ┃   +   ┃   -   ┃  -    ┃典型大肠杆菌
    - ┃   +   ┃   -   ┃  -    ┃非典型大肠杆菌
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
    + ┃   +   ┃   -   ┃  +    ┃典型中间型
    - ┃   +   ┃   -   ┃  +    ┃非典型中间型
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
    - ┃   -   ┃   +   ┃  +    ┃典型产气肠杆菌
    + ┃   -   ┃   +   ┃  +    ┃非典型产气肠杆菌
━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━
  如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做
重复试验。

结果报告:

  大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为++--或-+--,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN值。

编辑:foodyy

 
关键词: 大肠杆菌
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