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稀释平板测数法

放大字体  缩小字体 发布日期:2010-09-01  浏览次数:7728
核心提示:一、实验目的了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法,认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原

一、实验目的

了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法,认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。

二、实验原理

    稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞),再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。一般用于某些成品检定(如杀虫菌剂等)、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。

三、实验器材   

    1.活材料:苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)菌剂。

2.培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基附录三、1)

3.器材:90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等

四、实验方法

    1.样品稀释液的制备  准确称取待测样品l0g,放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置摇床上振荡20 min,使微生物细胞分散,静置20-30s,即成10-1稀释液;再用1ml无菌吸管,吸取10-1稀释液lml,移入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让菌液混合均匀,即成10-2稀释液;再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml,移入装有9ml无菌水的试管中,也吹吸三次,即成l0-3稀释液;以此类推,连续稀释,制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液(图22-1)。

22-1  平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养

用稀释平板计数时,待测稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时,稀释度应高,反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时,采用10-7、10-8、10-9稀释度,测定土壤细菌数量时,采用10-4、10-5、10-6稀释度,测定放线菌数量时,采用l0-3、10-4、10-5稀释度,测定真菌数量时,采用10-2、10-3、10-4稀释度。

2.平板接种培养  平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。

    (1)混合平板培养法  将无菌平板编上10-7、10-8、10-9号码,每一号码设置三个重复,用无菌吸管按无菌操作要求吸取10-9稀释液各1ml放入编号10-9的3个平板中,同法吸取10-8稀释液各lml放入编号10-8的3个平板中,再吸取10-7稀释液各lml放入编号10-7的3个平板中(由低浓度向高浓度时,吸管可不必更换)。然后在9个平板中分别倒入已融化并冷却至45—50℃的细菌培养基(图22-2),轻轻转动平板,使菌液与培养基混合均匀,冷后倒置,适温培养。至长出菌落后即可计数。

2)涂抹平板计数法  涂抹平板计数法与混合法基本相同,所不同的是先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中,待凝固后编号,然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上(每个编号设三个重复)。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀(图22-3),每个稀释度用一个灭菌刮铲,更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时,也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min,使菌液渗透入培养基内,然后将平板倒转,保温培养,至长出菌落后即可计数。

五、实验作业:

  将实验结果填入下表中

稀释度

10-7

10-8

10-9

菌落数

1

2

3

平均

1

2

3

 平均

1

2

  3

 平均

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1g样品活菌数

 

 

 

计算结果时,常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度,求出每克菌剂中的含菌数。

    (1)同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊。

    (2)细菌、放线菌、酵母菌以每30—300个菌落为宜,霉菌以每10—100个菌落为宜。

选择好计数的稀释度后,即可统计在平板上长出的菌落数,统计结果按下式计算。

混合平板计数法:

每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×稀释倍数

涂抹平板计效法:

    每克样品的菌数=同一稀释度几次重复的菌落平均数×10×稀释倍数

编辑:foodyy

 
关键词: 稀释 平板
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