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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):分泌型IgA的分离与

放大字体  缩小字体 发布日期:2006-06-27

(一)材料与试剂

1.初乳

2.SephadexG200

3.0.10Mol/L pH6.8PB液

4.0.01Mol/L pH7.4PB液

5.DEAE52

(二)操作方法

1.取初乳20ml,10 000rpm离心10min,弃去表面脂肪层及底部的沉淀物。

2.取乳清过SephadexG200柱(柱规格为2.50cm×90cm),以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脱,第一峰为IgA(含IgG)。

3. 收集乳液,于0.01Mol/L pH7.4PB液中透析。

4. 将透析液浓缩至5mg/ml以上。

5. 过DE52层析柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脱,洗下蛋白峰为IgG,弃去。

6. 换用0.10Mol/L pH6.8PB液或0.01Mol/L pH7.4PBS(0.10Mol/L NaCl)液洗脱,

收集洗脱液 ,即为较纯的IgA液。

7. 必要时,可再过一次SephadexG200柱。

8. 浓缩,鉴定


 
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