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BIOXL 猪口蹄疫亚O型一步法荧光RT-PCR诊断试剂盒说明书

放大字体  缩小字体 发布日期:2009-03-04  浏览次数:1167
核心提示:包括 48 个扩增反应所需的试剂 请在使用前通读操作说明书 1. 试剂盒组成 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere; 4oC 保存) 2 x 520 l FMDVA-1 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存) 2 x 25 l 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存) 1 x 10l Taq酶(Taq
包括48 个扩增反应所需的试剂
请在使用前通读操作说明书
1. 试剂盒组成
■ 25 管 扩增反应试剂球 (Reagent Sphere; 4oC 保存)
■ 2 x 520 μl FMDVA-1 扩增反应试剂球溶液 (Sphere Diluent; -20oC 保存)
■ 2 x 25 μl 阳性对照 (Positive control; -20oC 保存)
■ 1 x 10μl Taq酶(Taq Polymerase; -20oC 保存)
 
保存条件
试剂球需置干燥剂中保存在4oC,已融解的试剂球则需保存在零下20oC。其他试剂需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各试剂并充分混合,不要旋涡振荡含酶的扩增反应试剂。
 
2. 操作程序
 
扩增反应试剂的准备
1. 计算所需的反应数量 (n)
2. 需要溶解的试剂球 = 0.5 x n
3. 每个试剂球需要 40 μl 试剂球溶液及0.4μl Taq酶。
4. 在冰上溶解试剂,并轻轻扣击充分混合 (不要旋涡振荡含酶的试剂)
 
反应的准备
1. 实验中除从样本中获得的RNA 模板外,我们还建议设置阳性和阴性(水)对照
2. 按照下表准备扩增反应试剂:
 
反应组分
每个反应体积
扩增反应试剂
20 μl
样品RNA
5 μl
总体积
25 μl
 
注意:
■ 实验时 RNA 应放在冰上
■ 阳性对照建议加5 μl 试剂盒提供的阳性对照。
■ 建议PCR 过程中检测样本设置重复,以便得到可靠的实验结果
■ 为了验证阴性实验结果不是由于样本中存有PCR 抑制物而导致PCR 呈阴性反应,我们建议在测试样本中加1 μl 的阳性对照作为spiking 对照 (spiking control),同时进行PCR 反应。
 
 
 
PCR 循环:
                                             数据收集位点(FAM染料)
                                      ABI7700       ABI7300        其它仪器
1 个循环    42oC  30 分钟                 *
95oC  10 分钟                 *
5 个循环    95oC  10 秒                   *
45oC  30 秒                   *
72oC  60 秒                   *
40 个循环   95oC  15 秒                   *
58oC  60 秒                   *              *              *
                                                       ( * 表示位点收集FAM读数)
 
 
3. 实验数据分析
阴性的实验结果有几个可能性:
1. 样本中不存在目的片段;
2. 样本中目的片段的量低于检测值;
3. 样本中存有 PCR 抑制物。
试剂盒中设计spiking 对照 (spiking control) 是为了确定没有发生PCR 抑制。
如果样本中加了阳性对照以后扩增结果的Ct值接近40(或者接近阴性对照的Ct值),说明样本中存在PCR 抑制物,那幺此次阴性的实验结果就不能作为正确的结果,需要重新开始样本核酸的提取和PCR 扩增。

    北京祥龙环宇生物技术有限公司
    北京市朝阳区朝阳路财满街财经中心9号楼1单元702室 邮编100025
    电话 010-65567512   传真010-65563420
编辑:foodadmin

 
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