亦称游离细胞培养（free cell culfure）。是指酵母菌、细菌等单细胞生物的培养，或取多细胞生物体上的一个细胞的无菌培养。从多细胞生物中得到单细胞的办法是，开始对切离的组织的初始培养物（Primary culture）进行振荡培养，然后在连续培养中用适当的筛孔将游离的细胞分筛出来，再将收集起来的游离的单细胞悬浮在液体培养基中，最后用微量吸管吸取一个细胞。动物细胞的单细胞培养时，要适当稀释接种，为使得到的单细胞进行增殖，可以采用微量培养法和保护培养法，对浮游的单细胞群进行平面培养。单细胞培养物的目的，在于可以得到来自单个细胞的细胞群的无性繁殖系（clone）（无性繁殖系化）。