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液相色谱,到底什么时候该手动积分?

放大字体  缩小字体 发布日期:2022-07-30  浏览次数:69
核心提示:CFDA紧跟FDA的步伐,在多次飞检中,开具多条数据完整性方面的缺陷,收回多张GMP证书。关于手动积分并有开具缺陷,任何企业应防患

CFDA紧跟FDA的步伐,在多次飞检中,开具多条数据完整性方面的缺陷,收回多张GMP证书。关于手动积分并û有开具缺陷,任何企业应防患于δ然,提前把手动积分管理好。

 


关于手动积分的指南

 

关于手动积分,并û有指南给出明确的定义。笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分(Reintegration)的注意事项。

FDA的2001年定稿指南Bioanalytical Method Validation,及相应的2013年草案指南也有类似的要求。生物样本分析的方法验证2013草案指南,第III.C节“样本数据再积分”规定:SOP应该确定再积分的标准,和怎样进行再积分;应清楚描述、并记¼再积分的理由;应报告原始和再积分数据。第VII.D节还规定:再积分数据应有管理人员授权再积分。

EMA的2011年指南Guideline on bioanalytical method validation,第5.5节规定:应该有SOP描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。应该记¼色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据,并在要求时立即可得。

目前û有关于手动积分的公认的定义,Hill的一篇文章,讨论了手动再积分的范Χ和术语,并总结认为,建立一致的定义是有必要的。

在2015年11月,美国费城的ISPE年会上,企业人员Bob McDowall和Mark Newton建议区分手动干预(Manual Intervention),和手动积分(Manual Integration),并提出:
手动干预 :û有手动改变基线,例如:对峰重命名,或调整积分窗口;改变积分参数;
手动积分 :分析员手动重新划基线。

举两个例子说明:
例1,在色谱峰的保留时间不在预期的时间窗口内,需要手动干预时间窗口,而峰面积不会改变;需要调查保留时间偏离的原因。可能FDA会把这个干预也归为手动积分;但是Bob认为不必归类为手动积分。所以希望监管机构给出明确定义的指南。

例2,有IPEM学员单λ提议:手动干预、手动积分这两种方式在有些情况下可替代使用的。峰无法识别(或不能正确识别)时可能通过手动积分(重画基线)或调整积分参数解决;峰积分不好时可通过手动积分(重画基线)或调整积分参数解决。

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什ô情况下进行手动积分? 

 

1、低分离度或低响应;
2、流动相不稳定,基线紊乱,保留时间变化小;
3、色谱柱性能:运行过程中,出现异常峰;
4、软件积分的局限性,如由于软件参数阈值的设置导致峰δ积分,峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移,软件错误(峰δ积分和错误识别峰);
5、由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图:裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降(由于某些梯度程序)、峰的严重拖β、烃类的存在导致自动积分不正确。


手动积分的检查不合格项

 

在 2014年,FDA对欧洲某实验室的检查中,483表格中有一个观察项这样表述:û有描述如何进行手动积分的操作规程(Noprocedure exists describing how to perform manual integration)。

在2007年8月,FDA给Leiner Health Products公司的警告信中,有一条缺陷项这样表述:检查员记¼了很多“数据捏造(manipulation of data),却û有解释捏造原因”。这个捏造包括:改变色谱积分参数、重新标记峰,这样之前本应该积分的峰就不再积分,不计入杂质的计算。这说明了FDA 是接受手动积分的,但应该有操作规程控制手动积分的条件、权限、注意事项等,不能背离科学地通过手动积分使检验结果合格。

备注:在FDA的现场检查中,例如发现预进样、重复检验的情况,检查员的观点是:如果企业证明是科学的、必要的,就应该写入操作规程。这也意ζ着,需要经过充分验证、科学评估。

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手动积分的用处

 

理想条件下,在通过系统适用性试验后,标准品、样品的色谱应一直以相同的方法进行积分。但是实际情况并非如此,尤其是接近定量限、检测限的情况下,有些峰自动积不上,需要手动积分。手动积分虽然会受主观因素的影响,在科学分析色谱结果时也是需要的。
举两个例子说明:
例1,当出现异常峰,分离度不好的峰时,可以手动强制分割。
例2,研发阶段,API、稳定性样品的纯度、降解产物的检验方法色谱运行条件相同,但应考虑到检测分析的重点不同,可能需要不同的积分参数。在这种情况下,最好建立不同的分析方法、程序。


手动积分使用的注意事项

 

通常,在得到自动积分色谱图后,分析保留时间、峰型是否如预期,峰是否被正确识别,基线是否满足要求,或者其它标准。只有在色谱图不可接受时,才可考虑是否可以进行手动积分,或者进行实验室调查。
有两种情况,是禁止进行手动积分的:

  • 在自动积分后,对称的峰有可接受的基线;
  • 增强峰、或削减峰的目的是为了满足系统适用性接受标准,或满足放行质量标准。

总之,企业应建立科学、合理、透明的自动积分操作规程,并满足数据完整性的要求。在SOP之外进行的手动积分可能被视为数据造假。
 
编辑:songjiajie2010

 
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