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一、致病性弧菌的流行病学
1、致病性
在众多的弧菌之中，致病性差距很大。O1型霍乱弧菌被WHO定为国际检疫菌，而同时有许多种和生物型根本不具致病性。
生物分类学上的霍乱弧菌有许多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。
1995年《美国临床微生物手册》第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，它们的名称及致病情况如下表所示：
表1. 致病性弧菌及所致疾病
|
弧菌种类 |
临床表现 |
|||
|
胃肠炎 |
创伤感染 |
耳感染 |
败血症 |
|
|
O1型霍乱弧菌 O139型霍乱弧菌 拟态弧菌 河弧菌 副溶血性菌 霍利斯性菌 溶藻弧菌 弗尼斯菌 创伤弧菌 麦契尼可夫弧菌 海鱼弧菌 辛辛那提菌 鲨鱼弧菌 |
+++ +++ ++ + + ++ + ++ +++ + ++ + （+） ++ ++ + （+） ++ ++ （+） ++ ++ （+） ++ + + + |
|||
注：+++：常见；++：不常见；+：罕见；带括号者为肠道感染的病因作用尚未确定。
12种致病性弧菌的致病性差别较大，所致疾病的种类和毒性差别较大。在这12种致病菌中，最重要的，也是出问题最多的
是O1型霍乱弧菌、非O1型霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌。国内外均是如此。美国FDA在“食品微生物控制”中特别强调了这
四种菌，欧洲的NMKL也对这四种菌提出了特别要求，并有专门方法NMKL No.156颁布。
2、美国FDA对霍乱、副弧、创伤弧菌的认识（见表2）
3、致病性弧菌的控制
弧菌和其它G-菌一样，是嗜温型菌，生长需较高的温度，高水活度，中性pH。与其它不一样的是，生长需要盐，故而十分耐盐，
但轻微热处理很易将其杀灭。
蒸煮控制，防止二次污染，防止时间/温度控制不当（注意冷藏），控制产品来源。
二、致病性弧菌的分类学位置和生物学性状
1、致病性弧菌的分类
根据伯杰氏细菌手册第九版的描述，12种致病性弧菌的分类学位置如下表所示：
第5部分 革兰氏阴性兼性厌氧杆菌
弧菌科
弧菌属
致病性弧菌
伯杰氏细菌手册将细菌分为35部分（Group），第5部分为革兰氏阴性兼性厌氧杆菌，包括弧菌科、肠杆菌科、巴斯德氏菌科、
其他属，弧菌科包括弧菌属、发光杆菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和Enhydrobacter属。
弧菌属共有37个种（变种），其中已明确有12个种对人类有致病作用。弧菌属的种除了霍乱弧菌和拟态弧菌之外均为海洋性细菌，
即有嗜盐性；即使是这两种菌， Nacl的存在也能促进生长。
2、致病性弧菌的生物学性状
（1）致病性弧菌的基本特征
根据分类学位置，致病性弧菌首先属于弧菌科，所以具备弧菌科的所有特性：革兰氏阴性、兼性厌氧，（弧）杆状。
作为弧菌属，可从下列特性与弧菌科的其他四个属区别开来：DNA、G+C、 MOL%:38-51、O/129敏感：+、脂酶：+、 D-甘露醇
发酵：+、端生存鞘鞭毛+（其它没有）
（2）致病性弧菌生理生化特性比较
除此之外，12种致病性弧菌各有其不同的生理生化特征（见表3），这些特征是检测和鉴定的依据和基础。
表2.FDA/CFSAN对弧菌的描述
|
菌名 |
定 义 |
急 性 病名 |
病 症 |
感 染 剂 量 |
诊 断 |
相 关食 品 |
发 病 率 |
目 标 人 群 |
食 品 分 析 |
宿主 |
染病 类型 |
|
创伤 弧菌 |
只感染人和灵长类动物，已从整个美国西海岸及内陆盐湖分出，包括水、沉积物、浮游生物、贝类 |
伤口感染、胃肠炎、原发性败血病 |
16小时内发病，健康人患胃肠炎，特殊生理状况的人患原发性败血病该病死亡率大于50% |
健康人胃肠炎感染剂量不清，易感人群小于100个 |
从伤口腹泻物中培养出该菌 |
牡蛎、蛤蜊、蟹等 |
未有大爆发，零散的多，特别是在温暖月份 |
所有人易患胃肠炎，“特殊生理状况”的人易患原发性败血病 |
与粪便分离方法同，所有分离物均有致病性， |
港湾水域 |
感染 |
|
副溶血性弧菌 |
可从海水和河口湾的水体、鱼类、贝类中分出 |
副溶血性弧菌相关的胃肠炎 |
腹泻、腹部痉挛、恶心、呕吐、头痛、发烧、畏寒，多为中等反应 |
大于100万，服解酸药的更低 |
从腹泻粪便中分离出该菌 |
鱼类、贝类 |
温暖月份发生过大爆发，单个病例时有发生 |
所有食用了生的或加工不当的鱼类和贝类的人 |
必须验证分离物的致病性 |
港湾水域 |
感染 |
|
霍乱弧菌O1型 |
亚洲多，沿海和河口湾可能有，个例报道时有发生 |
霍乱 |
脱水、伴有淘米水样便、腹部痉挛、呕吐、休克甚至死亡 |
100万，有抗酸性结核病的更低 |
从腹泻粪便中分离出该菌 |
贝类 饮料 各种食品 |
美国73年来仅有80例 |
所有人都有可能，免疫系统发育不全，胃酸少，营养不良的更甚 |
由于致病性的和非致病性的都存在，故需做霍乱毒素实验 |
污水、人 |
感染 |
|
霍乱弧菌非O1型 |
只感染人和灵长类动物，存在于美国海与河口湾，称非霍乱菌和非凝集霍乱菌 |
胃肠炎、非O1型霍乱 |
腹泻、腹部痉挛、发烧、25%的呕吐、大便带血和粘稠物 |
猜想是大剂量（大于100万）才能引起疫病 |
从腹泻粪便中分离出该菌 |
贝类特别是牡蛎、各类食品 |
未有大爆发，单个病例时有发生 |
所有食用的个体，但肝硬化和免疫抑制的个体可能引起严重并发症如败血症 |
很多为非致病性的，需做致病性实验，可用动物实验做 |
港湾水域 |
感染 |
表3 致病性弧菌的鉴别性状
|
|
TCBS |
m C P C |
A G S |
Nacl生长 |
42℃生长 |
产 酸 |
氧化酶 |
ONPG |
VP试验 |
精氨酸二氢酶 |
赖氨酸脱梭酶 |
鸟氨酸脱梭酶 |
O/ 129
10 ug |
O/ 129
150 ug |
明胶酶 |
脲酶 |
|||||||||
|
0% |
3% |
6% |
8% |
10% |
|||||||||||||||||||||
|
蔗糖 |
D纤维二糖 |
乳糖 |
阿拉伯糖 |
D甘露糖 |
D甘露醇 |
||||||||||||||||||||
|
溶藻弧菌 |
Y |
NG |
KA |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
R |
S |
+ |
- |
|
霍乱弧菌 |
Y |
P |
Ka |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
V |
- |
+ |
+ |
S |
S |
+ |
- |
|
辛辛那提弧菌 |
Y |
nd |
nd |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
R |
S |
- |
- |
|
海鱼弧菌 |
G |
NG |
nd |
- |
+ |
V |
- |
- |
- |
- |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
V |
- |
S |
S |
- |
+ |
|
河弧菌 |
Y |
NG |
KK |
- |
+ |
+ |
V |
- |
V |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
R |
S |
+ |
- |
|
弗尼斯弧菌 |
Y |
NG |
KK |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
R |
S |
+ |
- |
|
鲨鱼弧菌 |
Y |
nd |
nd |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
nd |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
R |
S |
+ |
+ |
|
霍利斯弧菌 |
NG |
NG |
Ka |
- |
+ |
+ |
- |
- |
nd |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
nd |
nd |
- |
- |
|
麦氏弧菌 |
Y |
NG |
KK |
- |
+ |
+ |
V |
- |
V |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
S |
S |
+ |
- |
|
拟态弧菌 |
G |
NG |
KA |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
S |
S |
+ |
- |
|
副溶血弧菌 |
G |
NG |
KA |
- |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
V |
- |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
+ |
R |
S |
+ |
V |
|
创伤弧菌 |
G |
Y |
KA |
- |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
+ |
V |
+ |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
S |
S |
+ |
- |
|
嗜水气单胞菌 |
Y |
NG |
KK |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
V |
V |
+ |
V |
V |
V |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
V |
- |
R |
R |
+ |
- |
|
类志贺邻单胞 |
G |
NG |
nd |
+ |
+ |
- |
- |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
+ |
- |
- |
+ |
+ |
+ |
S |
S |
- |
- |
注：Y：黄色；G：绿色；P：紫色；NG：不生长；nd：不定；K：碱性；A：酸性；a：微酸；+：80%以上阳性；
-：80%以上阴性；V：不同的菌株反应不同；S：敏感；R：抗性
3、霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的部分生长和耐热参数
表4. 霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的部分生长和耐热参数
|
参数
菌名 |
生长参数 |
热致死参数 |
||||||||
|
最低 温度 |
最高 温度 |
最小 pH |
最大 pH |
最小 QW |
最大 含盐量 |
温度 |
D值 |
介质 |
||
|
UC |
UF |
|||||||||
|
霍乱弧菌 |
N/A |
45℃ |
N/A |
10 |
N/A |
6 |
60 |
140 |
2.65 |
蟹肉 |
|
副溶血弧菌 |
5℃ |
44 |
4.5 |
11 |
0.937 |
10 |
49 |
122 |
1.15 |
盐溶液 |
|
创伤弧菌 |
10 |
N/A |
4.5 |
N/A |
N/A |
8 |
||||
三、致病性弧菌的检测方法
1、具有代表性检验方法简介
（1）、FDA的细菌学分析手册
霍乱、付弧、创伤弧菌和其他弧菌（1995 1998修订）分别着重介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的方法。
用PCR方法检测产肠毒素的霍乱弧菌叙述了霍乱肠毒素（cholera Toxin (T)基因
（2）、AOAC官方分析方法
牡蛎中的霍乱弧菌：升温富集法（1995.a）
创伤弧菌的脂肪酸气相色谱鉴定法（AOAC.1995.b）
美国midi公司生产的shelock微生物鉴定系统。
（3）、ISO方法
副溶血弧菌的检测方法（ISO8914：1990E）
（4）、NMKL
食品中致病性弧菌的检测和计数（NMKL N0156）介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌的检测程序。
（5）、不同国家的方法
日本、瑞士等国均有相应检验方法。
2、致病性弧菌的检测方法
以上介绍的方法均是以单一或少数目标菌（NMKL为四种）为目的的设计的程序。鉴于国外对出口食品中多种致病性弧菌的要求和重视，
有必要探讨“同一程序同时检测多种弧菌”方法。
检验程序
25g样品+225mL APW(1% NacL pH9.0)
增菌 ↓37℃8-16h
取10mL加入双倍APW
↓37℃6-8h
选择 选择培养基 TCBS
（霍利斯用非选择性的羊血球琼脂）
↓37℃24h
定弧菌 取黄色或绿色菌落做G染色、氧化酶、动力、
↓ O/129(150ug)、D-甘露糖
分组 初步鉴定：0% NacL , 1% NacL、硝酸盐还原、精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧、 （氧化酶）
分成5组
↓
确证 最后鉴定
