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如何通过SDS-PAGE检测小肽?

已关闭 悬赏分:0 提问时间 2018-02-05 19:14 - 提问时间 2018-02-05 19:14
 
  • 您的样品是否含有<20 kDa的目标蛋白质?请下载如何使用SDS-PAGE检测合成肽的方案,其中包括考马斯蓝染色,银染和电印迹的有效方法。
    Tricine-SDS-PAGE常用于分离1-100 kDa质量范围内的蛋白质。它是用于分辨小于30kDa蛋白质的首选电泳系统。
    通过SDS-PAGE看到小肽确实是非常困难的。 Tris-tricine凝胶会给你更好的分辨率。如果您只想检测肽,质谱仍然是确认肽身份的最佳方法。
         小肽与较大的蛋白质结合较少的考马斯亮蓝色。因此,较小的肽通过考马斯染色或银染更难以检测。如果你真的想在凝胶上看到你的肽,你可以尝试加载更多的样品。除非您认为您的肽从凝胶中迁移出来,否则更换凝胶百分比不会有多大帮助。您可以增加常规17%凝胶中交联剂的百分比。此外,与常规8.8相比,将分辨凝胶的pH值提高到9.5。另外,尿素(4-8M)的添加有助于削尖带。
    如果您要使用西方,这是一种更灵敏的检测方法,请使用西方,而不是凝胶染色。然而,肽可以简单地穿过膜。如果你重复实验,试着把两片膜片和更短的时间转移(在200毫安时少于1小时)。 0.2um的毛孔就足够了。你可以得到更小的毛孔,但这不应该是必要的。您可能需要按设备的建议电流密度(mA / cm2)进行半干转印15-20分钟。短的15分钟转移时间适用于大多数小肽。
         如果您可以提前计划并合成用生物素标记的对照小肽,您可以监测转移过程及其与链霉亲和素缀合的HRP结合膜的能力。

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614 次关注     提问者: xrpeptides  


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