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LC-20A液相色谱操作规程

放大字体  缩小字体 发布日期:2010-11-05  来源:百度文库  浏览次数:5243
核心提示:LC-20A液相色谱,实现Web控制,具有卓越的检测灵敏度与极高的进样速度,率先在组合式HPLC中实现全自动化,是符合新时代要求的网络对应型HPLC。


1. 目的
规范岛津LC-20A型高效液相色谱仪的使用。
2. 适用范围
适用于岛津LC-20A型高效液相色谱仪的使用。
3. 适用对象
检测中心主任,检测主管,检测员。
4. 操作规程
4.1 系统组成
泵:LC-20AT;自动进样器:SIL-20A;色谱柱柱恒温箱:CTO-20AS;检测器:SPD-20A紫外检测器;RF-10AXL荧光检测器
4.2 检测准备
4.2.1制备所需的流动相,有机溶剂用0.45μm的有机滤膜过滤,水溶液用0.45μm的水滤膜过滤,超声脱气20min;
4.2.2连接色谱柱:将检测所需的色谱柱连接到柱温箱中;
4.2.3配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用0.45μm针孔式滤膜过滤进1.5mL样品瓶中;
4.2.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常;
4.2.5将准备好的流动相,依次插入相应的管道。
4.3启动仪器
4.3.1先启动电脑,再依次开启液相色谱检测仪组件:LC-20AT → CTO-10ASvp → SIL-20A → SPD-20A;
4.3.2双击,启动“LC Solution Launcher”,单击屏幕左侧的“Operation” 标签,点击,登陆LC solution 实时分析界面。
4.3.3单击“LC real time”左侧的按钮。进入System Configuration 模块,点击Reset复位,再点击uto configuration自动配置已连接仪器。
4.4进样准备
4.4.1设置进样方法:在实时分析界面的参数设置版面根据样品的需要设置合适的参数,保存为进样方法;
4.4.2系统排气:打开设定好的进样方法,点击右上角工具栏中的图标自动排气10min,然后点击工具栏的图标进行进样器排气25min;
4.4.3平衡色谱柱直到基线波动在±0.05mV为止(一般为30min);
4.4.4将准备好的样品瓶从编号1开始依次放入105孔样品架中。
4.5开始进样
4.5.1单次进样:点击按钮,弹出Single Run(单次运行)对话框,在Method file 中加载已保存的方法文件,在DATA file中键入数据文件名称,在sampler中vial#输入需要进样的样品瓶编号,在tray#输入样品架编号,在Injection输入进样量,点击OK确定,开始单次进样;
4.5.2批处理:点击按钮,会显示批进样列表,在Vial#输入需要进样的样品瓶编号(1、2……),在Tray#输入样品架编号1,在Sample Name中输入样品名称,在Sample Type 选择“Unknown”(未知),在Injection输入进样量,在Analysis Type中选择IT QT作定量定性分析,在Method file 中加载已保存的方法文件,在DATA file中键入数据文件名称,点击OK确定。然后点击保存方法。点击,开始批进样处理。要停止批处理分析,单击 [批处理] 助手栏中的图标。
4.6标准曲线的生成:
4.6.1创建数据分析参数:点击Data Analysis ,进入LC solution 再解析界面,弹出DATA Analysis Parameter对话框,打开标准样品的液相色谱图,点击Wizard,进入数据分析向导,设置所需的积分参数,点击下一步,在需要的保留时间的峰前面的方框内打√,点击下一步,选择标准样品级别(# of Calib),点击下一步,再点击下一步,在“Conc.”分别从低到高输入标准样品的浓度,其余参数不变,点击完成。点击右下角的View,点击File→Save Method File As,将积分方法文件命名并保存。
4.6.2将数据分析应用到原始方法:点击Batch Processing ,将标准样品的液相色谱图拖动到批量处理表中,在Sample Type 中的第一行设为“Standard:(I)”(点击单元格右下角的箭头,点击Standard→Initialize Calibration),下面各行设为“Standard ” (点击单元格右下角的箭头,点击Standard→Add Calibration Level),在Method File插入克伦特罗积分方法,在Level#分别由标准样品的浓度从低到高输入水平级别(1、2……),其余参数不变,然后点击批处理助手栏的开始校准;
4.6.3查看标准曲线:点击助手栏的Calibration,将显示标准曲线的相关数据,若不显示,则打开生成校准曲线的积分方法文件。
4.7计算样品浓度:
在LC Solution再解析版面,创建批处理表,将未知样品的液相色谱图拖至批处理表中,将Sample Type 全部设为“Unknown”,Method File全部插入保存的积分方法,Level#全部设为“0”,其余参数不变,然后点击批处理助手栏的,进行样品进行定量计算。双击样品的结果文件将看到所测样品在标准曲线的位置,点击右下角的Compound Table View中的“Result”,浓度显示在“Conc.”中。
4.8仪器关闭
4.8.1打开LC Solution 实时分析界面,冲洗管路20min,冲洗完毕后,点击工具栏的“Shutdown”图标,退出系统,然后按顺序依次关闭液相色谱检测仪组件电源:SPD-20A→SIL-20A→CTO-10ASvp→LC-20AT;
4.8.2关闭电脑,断开电源。
5注意事项:
5.1流动相必须要超声脱气20~30min,通过适当的滤膜过滤;
5.2水相必须要当天制备,放置太久的水可能会长菌,从而导致管路堵塞;
5.3进样器在进样的时候,不要打开自动进样器的门;
5.4检测完毕后,用甲醇冲洗管道20min,以免有样品在管路和柱子残留;
5.5关闭仪器的时候,必须先退出系统,听到“哔”一声之后,才能依次关闭仪器组件的电源;
5.6若长期不启动仪器,要将管道充满甲醇,卸下柱子,封住端口,以免柱子内的有机溶剂挥发掉而使柱子失效。

编辑:songjiajie2010

 
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