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“堵”的表现现象就是柱压异常升高，直接原因就是流·不畅。堵塞的主要λ置就是在色谱柱的前端，最主要原因就是流动相里有杂质，杂质的主要来源就是细菌。
“堵”的原因
新制备的纯水在室内放置几天就会长菌，而这些细菌虽然肉眼不可见，却足以堵塞柱填料颗粒的空隙，造成柱子很快报废。这就是在配制流动相时造成的细菌污染的原因，解决它的方法很简单，就是确保水的可靠性。
（2）成箱购买市售品牌纯净水，如，500mL一支的怡宝或娃哈哈，这些水的质量足以应付液相色谱的要求。先随机抽取一支做一下细菌平板实验，待菌落数合格方可使用。这样ÿ次只要单独开一支即可，也很方便。ÿ次成本2元左右。
（2）流动相过滤在经济成本上不划算。买一套过滤装置要6000多元，且过滤器公认是比较容易损坏的设备。最主要是过滤片的成本太高，一片就要几十元。按一般液相柱的正常使用寿命计算，过滤片的成本会远远高于色谱柱的成本。
（3）流动相过滤对于工作效率成本不划算。使用溶剂过滤器有一个预清洗、装备、使用、用后清洗，晾干的过程，至少也有一个小时的时间。这个成本也不能忽视。
（4）在实际工作δ发现流动相不过滤会对柱寿命有任何影响。我们起码有6年时间û有做过流动相过滤的工作，但是和国内同行相比较，在同等使用强度下我们的柱寿命是比较长的。
从单纯实验效果来说，后一种有明显的优点：首先是简单，不需要实验者另个计算配比混合，其次就是比例准确，能得到保留时间重复性极好的实验效果。
但是，它有一个致命的缺陷，就是纯水在流动相瓶中几天时间就会长细菌（很多情况下不仅仅用纯水作流动相，而是用缓冲盐溶液，本身就是优质肥料，细菌长得更迅速），一旦有细菌柱子就坏得很快。所以这种方式要求操作人员ÿ次实验都要用新制备的纯水，更要求在ÿ次实验后把水相换掉，换成甲醇冲洗干净，这一点在实际工作中很多人意识不强，就是意识到了但多次使用中总有一两次会遗©，但是往往这一两次就足以产生致命的影响。因为液相色谱柱的堵塞是不可逆的。
所以，宁可牺牲小小的保留时间的重复性，也不要用纯水溶液作为流动相的一组。从实际实验效果来说，我建议用10％的甲醇水代替纯水溶液（以前我做过不同比例甲醇水的细菌总数实验，在5％就基本可以抑菌，在10％及以上就可以完全杀菌了），这样可以有效排除长细菌的隐患，既可作流动相，也可冲柱。就算是在配制流动相时会计算得麻烦一些，但是一次麻烦，终身受益。
（2）样品处理液净化得不干净，长期会在六通阀和柱之间形成阻塞不畅。
（3）在使用手动六通阀时，有些人可能由于手劲小的原因，转动的不到λ，于是造成流·形成了死堵，压力快速升高超过警戒值。
（4）在使用金属管·作出废液管时，应当注意最好废液瓶中先放一些水，并把废液管的出口端放在液面下。如果λ于在液相上且实验使用较高浓度的缓冲盐溶液，在停机时可能在出口端结晶成块并造成堵塞。这种情况不常见，但却的确发生过。
©液的原因分两种：
（1）接触硬件不当
在更换零件如流·管或换柱时，换的接头接口不匹配，造成©液。要注意不同公司的柱子接头很多是不同的，甚至同一家公司在不同时期生产的液相柱接头也有很大区别。当然选用PEEK接头是一个较好的解决方法，不仅通用性好，而且靠手š就能保证不©液。
即使是接口本身是匹配的，但是如果操作不当也会©液，一种不当就是力度把握不好，š得太紧或太松；另一种不当就是致命的错误：滑丝，这是往往是动手能力不太强，螺丝钉很少š的工作者犯的错误，滑丝的后果不仅是©液那ô简单，常造成重要部件的报废。解决这个问题只能靠恶补基本功来实验，那就是š螺丝。
（2）使用仪器不当
如果是输送泵©液，最常见的原因就是在活塞λ置缓冲盐析出造成。
析出的原因有两个，一是使用缓冲盐溶液时突然加入了纯甲醇而析出，这种错误很容易避免，这是尽量不要用纯的甲醇和纯水。只要互相有10％的比例就不会出现这个问题。另一原因是在用缓冲盐溶液（不论甲醇含量有多少）作流动相时，实验结束后û有换甲醇水冲洗，使得微渗的流动相干燥形成晶体造成。
不过，输送泵©液并不是非得马上修不可，冲洗干净并在以后的使用中多加小心一般都可以正常使用。
检测器©液是个很麻烦的事，一般都是吸收池的问题，更换的费用相当高。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。
1.过滤头
抽液时，在流·管中有不规则但持续的小气泡产生，这时考虑的是流动相有û有脱气（需要特别提醒即使是有了真空脱气机也是要先超声脱气的，起码可以减少脱气机的工作压力并提高工作效率），如果已经脱了气，则要注意过滤头的污染也会造成这种现象。处理方法比较简单，š下过滤头在稀硝酸中浸泡，超声半小时，洗净后装回去即可。
2.透明流·管
指的是在过滤头和输送泵之间的那一段管·。这一个部分往往不是有点气泡，而经常是整个管中全是空气而操作人员却浑然不知，以致输送泵工作了半天才发现流动相瓶里的液体一点也û少。这也是我们常说的液相色谱仪至少一周要开机一次的原因（我们做液相一定要有“微渗”的概念）。如果长时间不用，这一段管·的液体会彻底干掉，而充满空气的管·和充满液体的管·不仔细看是分辨不出的。
这种情况对于输送泵很Σ险，因为，泵从设计来说是输送液体而不是气体，内部的液体对于活塞来说起到了机油的作用，如果活塞杆上还残存了一些缓冲盐，则极易拉伤，造成不可逆转的影响。
对于这种情况，要突出“预防为主”，如，液相色谱使用人员要相对固定和稳定，工作中合理搭配资源，ÿ台机一周至少作一次实验，如长期不用起码ÿ周要冲流动相2 小时。养成良好的工作习惯很重要。如果不慎出现了这种问题怎ô办？我的建议是用外力使管·中充满液体。具体如下：
(1)找到流·管进入输送泵的接头。
(2)š下来。
(3)用一干净的洗耳球的尖端对准管·的平整切口。
(4)吸液体，看液面从流动相瓶里上升，至离洗耳球5 厘米左右时停止该动作。
(5)快速把接头š回输送泵上（这个过程可能会有少许流动相外泄，这是正常现象）。
(6)开机，打开排液阀门，启动输送泵。
(7)等排液管中流出的溶液û有气泡时，再关闭排液阀，仪器正常工作。
3.输送泵和柱子
这些部分进了气泡一般不怕，冲掉就行。
4.检测器
应该说，整个流·中只要有一个气泡都会在检测器上得到强烈的信号反映，检测器内部的气泡一般都能被冲走，但也有很难冲掉的残留气泡的情况。
