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峰形咋看都不好,原因这里找一找~

放大字体  缩小字体 发布日期:2023-11-24
核心提示: 在做样品分析过程中,经常会出现色谱峰图异常的现象,比如前沿或者拖尾,这给我们的分析检测造成了很大的困扰。导致峰形异
 在做样品分析过程中,经常会出现色谱峰图异常的现象,比如前沿或者拖尾,这给我们的分析检测造成了很大的困扰。
导致峰形异常的原因有很多,接下来带大家了解一下常见的影响因素:
1超载
 当供试品进样量和进样体积在安全的范围内,改变进样量和体积会相应地影响到峰高和峰面积,而保留时间、峰宽和分离度的影响并不大,但当进样体积或者质量很大的时候,就会造成超载现象,伴随着峰宽增加、峰型变差和分离度降低。
柱长在50~250mm,内径4~5mm的色谱柱,单个样品的进样质量应该在50μg以内,进样体积小于25 μL。超载分为体积超载和质量超载两种,下面将分别对这两个超载对分离的影响做介绍。
(1)体积超载
(2)质量超载
超载会影响到色谱峰形,当进样体积和质量在合适的范围内,是获得良好峰形的保证,而又有哪些因素可以导致前延和拖尾呢,下面我们接着说。
2前延:(拖尾因子Tf<0.95)
1. 溶剂效应的影响
(1)用流动相溶解样品:
a.用纯甲醇溶解样品
b.用流动相溶解样品
(2)先强溶剂溶解样品,然后用流动相稀释
a.纯甲醇溶解
b.用流动相溶解样品
2、缓冲作用不合适:
a. 流动相为:乙腈:3%磷酸:无水乙醇=80:10:10
b.流动相为:(乙腈:3%磷酸:无水乙醇=80:10:10):50mM磷酸二氢钠=80:20
3、仪器系统不合适:
当超高效色谱柱(Ultimate® XB-C18,4.6×50mm,1.8μm)在常规的液相色谱仪上使用时,由于系统死体积大,会影响到峰形
3拖尾:(拖尾因子Tf>1.05)
1. 降低pH,抑制硅羟基的电离
a. 流动相:甲醇:磷酸盐缓冲溶液=70:30(混合好后,测得pH为4.07)
b.流动相:甲醇:磷酸盐缓冲溶液=70:30(甲醇和磷酸盐缓冲溶液混合好后用磷酸调节pH至2.49)
2、增加缓冲盐,加大缓冲作用
a. 流动相:甲醇:水=75:25  
b. 流动相:甲醇:50mmol/L磷酸二氢钠溶液=75:25 (混合好后,用三乙胺调节pH至8.40, 即200ml混合好的溶液中加入75ul三乙胺) 
3、因为每种缓冲盐的缓冲能力不一样,可以通过更换缓冲盐来调整:
a. 流动相:5mmol/L磷酸盐缓冲液(用磷酸调节pH值为4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
b. 流动相:5mmol/L醋酸盐缓冲液(用醋酸调节pH值为4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
4、屏蔽硅羟基的影响(如加入三乙胺)
a.流动相:磷酸盐缓冲溶液:甲醇=80:20b.流动相:磷酸盐缓冲溶液:甲醇:三乙胺=80:20:
编辑:songjiajie2010

 
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