目前很多实验室采用先配置所需量的稀释水到试管中再统一灭菌。在实验分析时发现由于稀释水在高压灭菌和冰箱存放这一系列过程中挥发，导致稀释水在做样时达不到所需的量。建议先用大容量玻璃瓶统一准备足量的无菌水和100ｍL的量筒，使用时在无菌环境下按所需量进行分装。无菌水的配制尽量在当天或实验前一天配置，最好实验当天进行配制。无菌水需要调pH值、可在常温保存。

培养基的质量是整个实验检测结果的保障，是实验室质量控制的重要环节。分 析人员可能认为只要培养基在保质期内，都是合格的，而忽略了对培养基进行质量控制。

培养基需在湿度低、温度不超过３０ ℃的房间避光保存，避免杂菌侵入。配置前，应该观察培养基颜色和体积，变化明显时废弃不用。配好的培养基需要在２ｈ内进行高压灭菌；对于不能及时灭菌的培养基，可以在冰箱内存放且不超过一天，因为灭菌不及时，就会影响其杀菌效果和营养成份的含量。培养基灭 菌结束后应迅速冷却，避免长时间保存在灭菌锅内，容易造成灭菌过度从而影响培养基的营养成分。配置的培养基不宜存放过久，坚持多配少量的原则，尽 量在一周内用完为好。每批培养基在使用前，都应对培养基进行质量鉴定，只有经过验证合格的培养基，才能投入使用。

有时候，企业污水、医疗废水等粪大肠菌群污染严重的水样需要稀释到10-4～10-5ｇ／mL之后接种，但分析人员不能准确判断其大致稀释倍数，容易出现超出或者低于定量范围。现行的环境监测分析方法与有关技术规范中粪大肠菌群检数表里所列的几个不定值（“＜”或“＞”）给监测工作带来一定的困难。能否选择出正确的稀释度是实验成败的关键。

接种的稀释比，为了避免在实 测 数 据 中 出 现 不 定值，实验分析人员应充分了解自己所做区域各种水样的稀释比，根据待检水样的环境因素和水样性质确定合适的稀释比。采样人员尽量将样品性质、受污染程度在采样记录上描述清楚，以供分析人员选择合适的分析方法。对于不确定稀释范围的水样，可以进行多种梯度稀释。

在使用多管发酵法测试时，如果在初发酵试验中未发现产气，可以适当地延长培养时间到48ｈ。

在使用酶底物法测试时，在培养24ｈ后结果为可疑阳性或者无颜色反应，可 适 当 延 长 培 养 时 间 到28ｈ进行结果判读，超过28ｈ之后出现的 颜 色 反 应 不 作 为阳性结果。如果样品有背景颜色，需做一个空白试验，与标准盘作比较。如果加入培养基，样品颜色过深，可能是余氯过多或者pH值过低的原因，这种方法就不适用了。

粪大肠菌群项目的监测起步比较早，但是之前一直作为非标项目，粪大肠菌群的质控标准菌株也是在近两年才兴起。大部分实验室分析人员之前没有接触过 质控，也没有接受过这方面知识的培训，在近两年密码样考核和实验室间比对中，该项目的效果不是很好。

目前国内使用的有证标准菌株几乎都是从国外购买的，价格贵、购买渠道复杂且不易保存。国内实验室很少有达到对每批样品 使 用 有 证 标 准 菌 株 进 行 阳 性、阴性对照试验。微生物的质控、盲样制作难度较大，影响了国内实验室关于微生物方面质量控制的开展。尽管如此，各个实验室也应该尽量做到，定期使用有证标准样品进行质量控制，使用有证标准菌株进行阴阳性对照试验。酶底物法要求，每年至少必须进行６次定量试验、４次定性试验。
4.2 空白和平行性

以前使用的多管发酵法、滤膜法等对空白和平行性没有明确的要求。大部分实 验室也仅限于对每批样进行空白测定。

无论用哪种方法检测，建议每个月要对实验室用水做质量检测，每批样品要用无菌水做全程序空白和实验室空白测定，确保检测结果的准确性和可靠性。使用酶底物法分析时，对20个样品或每批次样品测定一个平行双样。