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菌总计数容易会出现哪些问题呢？
1、在营养成分单一、保存条件苛刻的食品（水、水产品等）中，微生物复苏、生长缓慢，培养48h计数时容易遗漏
2、一些食品处理后，仍存在类似菌落的颗粒状杂质，很难判断是菌落还是杂质
3、一些食品容易污染变形杆菌等运动性较强的蔓延菌，培养后无法计数。
关键是，能力验证是考察实验室检验能力的外部质量活动，组织方提供试验样本，在菌落总数项目上，一般会考虑增加上述难度。
防止蔓延的方法有哪些？
No.1 增加覆盖一层琼脂培养基
蔓延菌大多为需氧菌，覆盖一层琼脂的目的是隔绝空气，降低需氧菌生长速度。
No.2 添加TTC
TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑），不仅可以使菌落产生红色，便于辨识，也可部分地抑制大片蔓延菌落的形成。
No.3 陶瓦盖代替平皿盖
用陶瓦盖代替平皿盖，可有效去除培养基表面水分，阻止细菌移动，有效抑制蔓延。倾注培养基凝固后，用陶瓦盖（干热灭菌）代替平皿盖，正置放入培养箱培养。
❓以上三种方法哪种最好呢？
👉真相大揭秘
方法：我们分别采用PCA直接倾注法、覆盖一层培养基法、TTC法、用陶瓦盖代替平皿盖法对同一样本进行菌落总数计数。其中，TTC培养基冷却至56℃左右加0.5%的TTC溶液（1mL/100mL）。陶瓦盖法平皿正置放入培养箱培养。
从6小时开始观察菌落生长情况并计数，以后每隔12小时观察1次。
结 果
PCA直接倾注法菌落生长相对较快，培养24h，菌落数已达到峰值，其他方法平板培养36h或48h后，达到峰值。
添加TTC的平板菌落生长相对比较缓慢，且培养到最后，菌落依然比较小，但总体检出数值较高。其原因是TTC平板能将部分细小菌落，或生长于琼脂内部、颜色与平板颜色相近，肉眼不易观察的菌落计出。
有图有真相
单因素方差分析，P＞0.05（95%置信度），四种试验计数结果并无显著差异。按照微生物能力验证的数据统计分析原则，当Z≤2时方为满意结果。因此虽然方法之间数据差异不大，但有必要提高检验技术，将结果控制在最准确的数值范围之内，才能保证在能力验证评价中取得满意结果。
