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乳汁体细胞计数法

放大字体  缩小字体 发布日期:2010-06-21  浏览次数:1856
核心提示:  推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。  体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接

  食品伙伴网注:本方法源自奶牛乳房炎防治技术指南(试行)(农医发[20l0]29号)

  推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。

  体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数(SCC),间接计数法就是后面提到的CMT。法。

  l主要试剂和材料

  美蓝染色液:美蓝乙醇饱和溶液30mL.(美蓝2g,95%乙醇100mL),10%氢氧化钠溶液0.1mL,蒸馏水100mL,将上列溶液混合摇匀,过滤后备用。二甲苯、95%乙醇。生物显微镜、载玻片、l0μL。微量加样器(或移液枪)等。

  2操作方法

  2.1涂片制备

  涂布:充分摇匀新鲜乳样,用l0μL微量加样器吸取中部乳汁l0μL,或用接种环蘸取等量的乳汁,将乳样滴于玻片一端中侧,仔细涂布成约lcm2。面积的乳膜(为便于操作,可在玻片下垫衬一张硬纸板,纸板上用毛笔划数个面积为lcm2的方格透视)。

  干燥、脱脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃温箱中干燥,然后用二甲苯脱脂5min,再置95%乙醇中固定5~10min。

  染色:玻片干燥后,用美蓝染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脱色数分钟,水洗干燥后镜检。

  镜检及计数:在生物显微镜油镜下观察(最好用l0×目镜,其视野直径要求为0.016),计数100个视野内的细胞数,然后用下式计算:SCC=100xN/Лr2

  视野面积Лr2=3.1416×(0.016/2)2。=0.0002cm2,

  显微镜系数N=I/0.0002×100=500,000

  SCC=系数×每个视野的细胞平均数(即细胞总数÷100):细胞数/mL乳。

  3判定标准

  随着国际和国内乳品行业的接轨,国内标准也在提高,一般以每毫升牛奶中含20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值(+);超过该值为阳性,低于该值则正常。

编辑:foodyy

 
关键词: 乳汁 体细胞
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