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基因枪的使用方法

放大字体  缩小字体 发布日期:2010-12-31  来源:中国生物器材网  浏览次数:3290
核心提示:基因枪的使用操作方法

1、材料准备
在9cm2培养皿上铺一薄层培养基,把材料(一般用未成熟胚、成熟胚、小愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等)平铺于培养皿中心,直径在3cm范围内。

2、金粉的处理
取60mg金粉或钨粉置于离心管中,加入lml无水乙醇,充分振荡3min,以9615g离心1rain,去上清,再加入lml无菌水充分混匀后,以9615g离心,重复上述步骤3次。最后,将金粉悬浮于lml无菌蒸馏水中,置4‘C或室温下储存。

3、DNA的处理
取50tA金粉悬浮液,依次加入5rd的质粒DNA(1.0/lg~1)溶液、50//l 0.1mol/L亚精胺(所用的溶液经无菌消毒),振荡3rain后,在室温下放置10min,以9615g离心10s,弃去上清液;加入250~1无水乙醇,振荡后以9615g离心10s,弃上清液。沉淀重新悬浮于60/1l无水乙醇中,可供5枪(每枪10~1)使用。

4、基因枪的操作
基因枪的所有操作均在无菌条件下进行,具体步骤如下:
1)先用70%乙醇对基因枪表面及样品室进行消毒。同时,用70%乙醇将阻挡网和可裂圆片,微弹载体及其固定器、固定工具浸泡15min后,放在超净台上晾干。可裂膜片、固定盖、微弹载体发射装置可用70%乙醇进行表面灭菌,吹干。
2)将微粒载片嵌入固定环中,取DNA及金粉的混合物加于微粒载片中心,干燥lmin左右。
3)安装可裂膜于其托座上,顺时针拧到气体加速器上。
4)将空间环、阻挡网、阻挡网托座、微粒载片及固定环(带有微粒的面朝下)安装好,旋紧盖子,插入抢中。
5)把样品放在轰击室中,关好门。
6)打开氦气瓶的总阀,顺时针转氦气调节阀,使氦压表指针的示数高于可裂膜压力200Psi(=1.379MPa)。
7)打开基因枪及变压器开关。
8)按动真空键,待真空度至26—28in Hg(=88.05~94.82kPa)时,迅速按下Hold键,接着按住发射键,并保持不动,直到激发为止。
9)按通气键待真空表归零后,取出样品。
10)关机。
把氦气瓶的总开关旋紧,打一次空枪,把氦压表指针归零后,再逆时针旋转氦压表调节阀;关闭基因枪的总开关及变压器开关。

 

编辑:songjiajie2010

 
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关键词: 基因枪 使用 操作
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