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沙门氏菌常用培养基的配方及原理

放大字体  缩小字体 发布日期:2016-12-23  来源:食品实验室服务公众号  浏览次数:1481
核心提示:1、沙门氏菌简介 沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。菌体大小(0.6~0.9)(1~
1、沙门氏菌简介

  沙门氏菌病的病原体。属肠杆菌科,革兰氏阴性肠道杆菌。已发现的近一千种(或菌株)。菌体大小(0.6~0.9)×(1~3)微米无芽胞,一般无荚膜,除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外,大多有周身鞭毛。营养要求不高,分离培养常采用肠道选择鉴别培养基。生化反应对本属菌的鉴别具有重要参考意义。不液化明胶,不分解尿素,不产生吲哚,不发酵乳糖和蔗糖,能发酵葡萄糖、甘露醇、麦芽糖和卫芽糖,大多产酸产气,少数只产酸不产气。VP试验阴性,有赖氨酸脱羧酶。DNA的G+C含量为50~53%。对热抵抗力不强,在60℃15分钟可被杀死。在水中存活2~3周。

2、检测流程见表1
3、培养基原理

微生物检测培养基
 
3.1 缓冲蛋白胨水Buffered Peptone Water

用途:用于沙门氏菌、阪崎杆菌前增菌培养(GB2008标准)
配方:(g/L)
用法:称取本品20.0g ,加热溶解于1000ml蒸馏水中,121℃高压灭菌15分钟备用。
 
3.2 四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB) Tetrathionate Broth Base
 
用途:用于沙门氏菌选择性增菌培养,需加入煌绿和碘液。
配方:(g/L)
用法:称取本品93.55g,溶解于1050ml 蒸馏水中,加热煮沸,临用前加入 20%  碘液 20ml,0.5%  煌绿 2ml,现配现用,不宜久置。
 
3.3 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)Selenite Cystine Broth
 
用途:用于沙门氏菌选择性增菌培养(GB、SN标准) 。
配方:(g/L)
用法:称取本品23.0克,加热溶解于1000ml蒸馏水中,无菌操作分装于灭菌三角瓶或试管中备用。当天制备当天使用,无需高压灭菌。

3.4 亚硫酸铋琼脂(BS)(GB4789)
 
配方(g/L):
用法:将前三种成分加入300 ml蒸馏水(制作基础液),硫酸亚铁和磷酸氢二钠分别加入20 ml和30 ml蒸馏水中,柠檬酸铋铵和亚硫酸钠分别加入另一 20 ml和30 ml蒸馏水中,琼脂加入 600ml蒸馏水中。然后分别搅拌均匀,煮沸溶解。冷至 80 ℃左右时,先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀,倒入基础液中,混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀,倒入基础液中,再混匀。调节 pH,随即倾入琼脂液中,混合均匀,冷至50 ℃~55 ℃。加入煌绿溶液,充分混匀后立即倾注平皿。
注:本培养基不需要高压灭菌,在制备过程中不宜过分加热,避免降低其选择性,贮于室温暗处,超过48h会降低其选择性,本培养基宜于当天制备,第二天使用。
 
3.5 XLD培养基XyloseLysineDeso
 
用途:选择性培养基,主要用于分离志贺氏菌属,亦可用于分离沙门氏菌。
配方:(g/L)
用法:称取本品5.7g,加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中,不要过分加热,冷至 50℃左右时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥 2h,然后盖上,备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。
 
3.6 HE琼脂
 
用途:用于沙门氏菌的选择性分离培养(GB标准)
配方:(g/L)
原理:溴麝香草酚兰和酸性复红为pH指示剂,发酵糖产酸的菌落呈红色,不发酵糖的菌落为蓝绿色。
用法:称取本品 95.8g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中, 冷至50-55℃时,倾入无菌平皿,本培养基不需要高压灭菌。
 
生化培养基。
 
3.7 三糖铁(TSI)琼脂Triple Sugar Iron Agar
 
用途:生化培养基,用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选(GB2008标准)
配方:(g/L)
用法:称取本品 64.5g,加热溶解于1000ml 蒸馏水中,加热煮沸 1分钟,分装于 16mm× 150mm试管,121℃高压灭菌 15 分钟制成斜面长 4-5cm,底部长2-3cm。
 
3.8 赖氨酸脱羧酶试验培养基
 
用途:用于细菌检验中赖氨酸脱羧酶试验。
配方:(g/L)
用法:除赖氨酸以外的成分加热溶解后, 分装每瓶100 ml,分别加入赖氨酸。L- 赖氨酸按0.5%加入, DL-赖氨酸按1 %加入。调节 pH。对照培养基不加赖氨酸。分装于无菌的小试管内,每管0.5 ml, 上面滴加一层液体石蜡,115 ℃高压灭菌 10 min 。
 
3.9 尿素琼脂(pH 7.2)
 
用途:生化培养基,用于细菌脲酶检测(GB、SN标准)
配方:(g/L)
用法:称取本品 2.1g,加热搅拌溶解于 95ml 蒸馏水中,121 ℃高压灭菌 15 分钟,冷至 50-55 ℃,加入无菌的 40% 尿素水 5ml, 混匀,分装试管, 放成斜面备用。注:本批粉末颜色呈粉红色。
 
3.10 糖发酵管
 
配方:
制法:
①葡萄糖发酵管按上述成分配好后,调节pH。按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小 管的小试管内,121℃高压灭菌 15 min 。
②其他各种糖发酵管可按上述成分配好后, 分装每瓶100 ml,121℃高压灭菌15 min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌。将 5 mL糖溶液加入于100 mL培养基内,以无菌操作 分装小试管。
注:蔗糖不纯, 加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。
试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36 ℃±1 ℃培养, 一般2d~3d。迟缓反应 需观察14d ~30d 。
编辑:foodec007

 
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